碧螺春、龙井、毛峰、毛尖绿茶中槲皮素含量的测定与比较

目的:探讨几种绿茶中槲皮素的含量。

方法:建立高效液相色谱(HPLC)法分别测定市售龙井、碧螺春、毛峰、毛尖茶叶中槲皮素的含量。

结果:高效液相色谱测定系统可以分离得到龙井、碧螺春、毛峰、毛尖茶中的槲皮素,其中龙井的槲皮素含量。实验的精密度与重现性好。结论:通过对几种绿茶中槲皮素含量的测定和比较，得出较优者。为人体膳食调节提供理论依据，并为茶叶深加工提供信息。

茶叶中的多酚物质[1]是由黄烷醇类、花色素类、花黄素类、缩酸、缩酚酸类和槲皮素组成,其中槲皮素可清除自由基[2],有,抑制促癌剂的作用,及抗血小板凝集和5-羟色胺(5-HT)的释放作用;可抵抗病毒,防感冒,并有较好的祛痰、止咳作用,用于慢性;还可起到、增强抵抗力、降血脂、增加冠状动脉血流量等作用，对出血性疾病、循环障碍、动脉粥样硬化等具有较高疗效,对冠心病及高血压患者有辅助作用。本文应用高效液相色谱法测定龙井、碧螺春、毛峰、毛尖的槲皮素含量,实验流程简单,效果良好,可作为绿茶质控的一种参考。通过对几种绿茶中槲皮素含量的比较,得出较优者。为人体膳食调节提供理论依据,并为茶叶产品在生化方面的深加工提供信息。现报道如下：

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1材料与方法

1.1供试材料、仪器与试剂

绿茶样品为市售的西湖龙井，洞庭碧螺春，黄山毛峰，信阳毛尖。高效液相色谱仪:岛津LC-10ATvp液相色谱仪,包括LC-10AT色谱泵、SPD-10Avp紫外检测器、混合器;色谱柱：PhenomenexGeminiC18。超声清洗器。槲皮素对照品购自sigma公司。

1.2实验方法

1.2.1色谱条件色谱柱:PhenomenexGeminiC18(5μm,4.6mm×250mm)。流动相，A相：乙腈-甲醇(9∶1),B相:0.15%醋酸铵溶液梯度洗脱。程序为：0～10min,从10%A线性梯度15%A;10～50min，从15%A线性梯度50%A;50～55min，线性梯度从50%A80%A。每次运行结束后以初始流动相平衡色谱柱20min，以保证出峰情况稳定。检测波长为280nm,流速为1.0ml/min，进样量：20μl，柱温为25℃。甲醇、乙腈为色谱纯。实验用水为双蒸馏水。

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1.2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品10mg置100ml容量瓶中,用甲醇溶解并定容刻度,摇匀,即得浓度为100μg/ml的槲皮素对照品溶液。

1.2.3供试品溶液的制备取龙井、碧螺春、毛峰、毛尖各200g茶样,100℃水浴浸提,抽滤,再用氯仿、乙酸乙酯分别萃取酯层和水层,浓缩,减压干燥,得到粗粉,研细,待用。精密称取细粉约1.0g置具塞锥形瓶中,精密加入50%(体积分数)的甲醇20ml,密塞,称定重量,超声处理20min,放冷,再称定重量,用50%(体积分数)的甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,精取续滤液5ml,置10ml容量瓶中,并用甲醇定容刻度,摇匀,经0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。

2结果与分析

2.1高效液相法分离绿茶槲皮素峰1为槲皮素,2为表没食子儿茶素(EGC)。

2.2系统适用性试验分别取对照品溶液、供试品溶液各20μl进样测定,理论塔板数大于50000，供试品溶液中槲皮素峰与相邻杂质峰的分离度大于1。

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2.3线性关系考察精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品20.0mg置100ml容量瓶中,用甲醇溶解并定容刻度,分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6、7ml置于10ml容量瓶中,加甲醇稀释于刻度,摇匀,制成标准系列。分别精密吸取各溶液20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。以槲皮素峰面积(Y)为纵坐标,以槲皮素进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程为:Y=1.714216224X,r=0.9471,结果表明槲皮素在0.4～2.8μg范围内与峰面积的线性关系良好。

2.4稳定性试验精密吸取龙井茶供试品溶液，依上述色谱条件,分别在0、12、24、48、72、96h进样20μl，测得槲皮素的峰面积为37316，37321，37325，37312，37321，37319，RSD值为0.05%，表明供试品在96h内稳定。

2.5精密度与重复性试验取槲皮素对照品溶液,在上述色谱条件下进行分析,连续进样6次,测定其峰面积,槲皮素峰面积为32450,32391,32355,32570,32390,32246,结果计算RSD值为0.738%(n=6),结果表明精密度高。取龙井茶细粉5份,每份1.0g,按“1.2.3项”方法制备样品溶液,后按上述色谱条件进行分析,槲皮素峰面积为37317,37113,37642,37504,37214,RSD值为1.15%,结果表明重复性良好。

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2.6加样回收率试验精密称取已知含量的龙井茶细粉5份,每份1.0g,分别加入槲皮素对照品适量,按“1.2.3项”方法制备样液,后按上述色谱条件下,注入色谱仪,测得槲皮素的含量,结果平均回收率为99.83%,RSD值为0.96%.

2.7含量测定每种绿茶样品,每种精取细粉1.0g,按“1.2.3项”下方法制备供试液,在上述色谱条件下,分别精密吸取按“1.2.2项”和“1.2.3项”方法制备好的对照品溶液及供试品溶液各20μl,进样,测定各自峰面积,按外标峰面积法计算龙井、碧螺春、毛峰、毛尖中槲皮素的含量。结果见表1。

3讨论

绿茶是我国特有的茶类,历史悠久,近年来有研究绿茶中槲皮素的综合提取工艺技术,主要考察了绿茶多酚的浸提条件,茶多酚浸提液的超滤条件,大孔吸附-树脂纯化茶多酚的层析技术,高效液相色谱分析槲皮素含量。目前有关绿茶加工技术及理论的研究主要集中在工艺优化、品种与工艺的关系、加工中在制品香气、滋味成分的组成与变化等方面[3],而对于绿茶品质化学的深入研究,还有待进一步加强。

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高效液相色谱法已应用到绿茶中槲皮素的分离,溶剂体系的选择是高效液相色谱法分离的关键环节。本实验考察了不同比例的流动相,确定流动相乙腈和甲醇的比例,从而使样品中槲皮素达到良好的分离。检测波长选取280nm,因为槲皮素是从茶多酚中提取的,茶多酚中的儿茶素类物质与槲皮素在280nm都有较高吸收[4],而且通过实验结果发现测得结果理想,所以选取该波长。

4 种茶分离得到的槲皮素,以龙井的槲皮素含量;4种茶的EGC都较高,说明绿茶中含大量的EGC,其中碧螺春的EGC含量。